原代細胞的分離培養：

原代培養即直接從有機體取下細胞、組織或器官，讓它們在體外維持與生長。原代培養的特點是細胞或組織剛離開機體，它們的生物性狀尚未發生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內的狀態，表現出來源組織或細胞的特性， 因此用于藥物實驗，尤其是藥物對細胞活動、結構、代謝、有無毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養法有組織塊培養法和消化培養法。

（一）組織塊培養法

許多實驗室喜歡用組織塊培養法進行原代培養，因為方法簡單，細胞也較容易生長。尤其是培養心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養皿或培養瓶后， 即可進行傳代。

1. 設備材料

培養箱、冰箱、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養瓶、培養皿、消化液、基礎培養液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無菌條件下，取待培養的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。

（2）用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養液。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養皿內表面，吸去多余的培養液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養皿蓋，做好標記， 置37°C 的CO2培養箱內。

（6） 2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養液少量，以使組織塊浸沒在培養液中。

（7）輕輕地將培養皿及組織塊移至CO2 培養箱， 如無特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈。

（9） 一般說來，若培養液無明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細胞長滿整個培養皿內表面，即可進行傳代培養。

牛外周血白細胞

細胞基本屬性：

細胞鑒定：血涂片，Giemsa染色驗證

支原體檢測：牛外周血白細胞不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

產品規格：5×105cells/T25或1mL凍存管

培養基：牛外周血白細胞專用培養基

培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

細胞代數：第1代

產品貨期現貨，1周左右

運輸方式T25培養瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應限制僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

背景介紹：

公司正在出售的產品：

小鼠S100鈣結合蛋白B(S100B)ELISA試劑盒 ，英文名： S100B ELISA Kit

人纖溶酶抗纖溶酶復合物(PAP)ELISA檢測試劑盒Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit 96T/48T

大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )免疫試劑盒 Rat skeletal muscle Actinin-α,sm Actinin-α ELISA Kit

英文名稱Rat17-KSELISAKIT大鼠17-同皮質類固醇(17-KS)規格：96T/48T

裂解液IX：真菌/酵母細胞裂解液50次

ELISAKitNGB人腦紅蛋白規格：48T/96T

小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human granzyme A (Gzms-A) ELISA Kit 人顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒

Humaelaxin,RLNELISAKit 人松弛肽/松弛素(RLN)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor6-OHDA(Human6-hydroxydopamine)ELISAKit人6-羥多巴胺規格：48T/96T

銀染法組織端粒酶活性AP電泳分析試劑盒10次

MouseMelatonin,MTELISAKit小鼠褪黑素(MT)ELISA試劑盒規格：96T/48T

牛外周血白細胞血管內皮生長因子A   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor A   規格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-A

血管內皮生長因子C   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor C   規格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-C

血管內皮生長因子D   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor D   規格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-D

血管內皮生長因子165   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor 165   規格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF165

操作方法：

組織塊直接培養法（原代細胞培養實驗）

材料與儀器

【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數量的未分化的間質細胞，成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個；3、50ml離心筒2個4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個6、細胞計數板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉移至一個小的無菌培養皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無菌狀態下，將絞碎的胚胎轉移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動。4)在溫暖的環境中或置于37°C培養箱中輕輕搖動15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體轉移至一無菌50ml的離心管中，該管內按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復步驟4和5。7)離心混合的細胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止。